一、實驗?zāi)康?br/>
了解細胞骨架的結(jié)構(gòu)特征及其制備技術(shù)。

二、實驗原理

細胞骨架（cytoskeleton）是由蛋白質(zhì)絲組成的復(fù)雜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)其組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態(tài)的維持，細胞的生長、運動、分裂、分化，物質(zhì)運輸，能量轉(zhuǎn)換，信息傳遞，基因表達等起到重要作用。當用適當濃度的Triton X-100處理細胞時，可將細胞質(zhì)膜中和細胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，但細胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受破壞而被保存，經(jīng)用戊二醛固定，考馬斯亮藍 R250染色后，可在光學(xué)顯微鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，就是細胞骨架。

三、實驗器材、藥品

材料：洋蔥鱗莖。

器材：普通光學(xué)顯微鏡、滴瓶、容量瓶、試劑瓶、燒杯、載玻片、蓋玻片、鑷子、小剪刀、吸水紙、擦鏡紙。

藥品：

（1）M緩沖液（加水定容到1000ml）

（2）磷酸緩沖液(pH 6.8)：0.2 mol／L 磷酸緩沖液，用NaHCO₃調(diào)至 pH6.8。

（3）1%Trion X-100：用M緩沖液配制.

（4）0.2％考馬斯亮藍R250：其溶劑為甲醇46.5ml，冰醋酸7ml，蒸餾水46.5ml。

（5）3%戊二醛：用0.2 mol／L磷酸緩沖液配。

四、實驗步驟

1.取洋蔥鱗莖切成大小約0.5cm2的塊狀，置磷酸緩沖液內(nèi)浸泡3－10小時；

2.將浸泡后的鱗莖小塊移動到1％的Trion X-100中處理30min；

3.用M-緩沖液洗3次，每次5分鐘；

4.放入3％戊二醛中固定30分鐘；

5.磷酸緩沖液洗3次，每次2min；

6.考馬斯亮藍染色30分鐘；

7.水洗、鋪展、裝片、鏡檢。